SynCloning™ Precision Tools
1. Ligation Mix & Molar Ratio Calculator (多片段連接與動態體系配比計算)
Insert 濃度太低而被迫使用「固定體積」強行加滿時,雖然工具會幫你算出真實莫耳比。但此時總 DNA 體積大幅上升,會嚴重稀釋體系中 10X Ligation Buffer 與 T4 DNA Ligase 的濃度。
雖然工具允許調高載體質量(Mass),但在標準 20μL 的連接體系中,總 DNA 質量(Vector + All Inserts)建議控制在 20ng 至 100ng 之間。
2. Transformation Efficiency Calculator (轉殖效率計算)
計算效率時,輸入的質體質量(Input Control DNA Mass)絕對不能過高。通常進行 TE Assay 只能加入 10pg 到 100pg 的超微量高純度質體(如 pUC19)。
如果直接加入 10ng 甚至 1μg 的質體去塗盤,感受態細胞表面早已飽和,長出的菌落數(CFU)不會成線性比例增加。這會導致計算器分母過大,嚴重低估(Underestimate)細胞的真實轉殖效率。
系統包含三階評估:
綠燈(優異):達到商業感受態細胞(Competent Cells)水準,適合做複雜文庫。
黃燈(標準):常規實驗室自製細胞(如 CaCl2 法)水準,常規選殖可用。
紅燈(偏低):警示活性過低,如果後續長不出菌落,直接提示該重新製備感受態细胞。